用于將細(xì)菌區(qū)分成革蘭氏陽性或革蘭氏陰性之染色液。傳統(tǒng)革蘭氏染色方法對(duì)于脫色時(shí)間較難掌控,往往因?yàn)槊撋^度,而將應(yīng)該是Gram陽性菌誤染成Gram陰性菌,其所花費(fèi)的時(shí)間更長達(dá)4分鐘之久??焖俑锾m氏染色液可以大幅縮短染色時(shí)間,整個(gè)染色過程只需1分鐘,而且?guī)缀鯖]有偽陰性惰形發(fā)生,是目前實(shí)驗(yàn)室最佳的選擇。試藥內(nèi)容:1.結(jié)晶紫(Crystal Violet) x 1 250ml2.碘液(Iodine Solution) x 1 250ml3.脫色劑(Decolorizer) x 1 250ml4.沙黃溶液(Safranin Solution) x 1 250ml操作方法:1. 加結(jié)晶紫,染色10秒,之后水洗,甩干。2. 加碘液,染色10秒,之后水洗,甩干。3. 以脫色劑脫色10~20秒,之后水洗,甩干。4. 最后加沙黃溶液,復(fù)染10秒,之后水洗。5. 以濾紙吸干或在空氣中陰乾后,鏡檢。結(jié)果判定:Gram陽性菌(Gram-Positive)呈紫色。Gram陰性菌(Gram-Negative)呈紅色。
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1、操作步驟 (1)取下顯微鏡的防塵罩,接通電源,開啟電源開關(guān),根據(jù)玻片性質(zhì)調(diào)整內(nèi)置照明燈光亮度及光圈大小,使視野亮度處于合適范圍; (2)將事先準(zhǔn)備好的玻片放到載物臺(tái)上,用標(biāo)本片夾持器夾好,轉(zhuǎn)動(dòng)移動(dòng)手輪使等觀察樣品大致位于物鏡正下方; (3)拉開顯微鏡的電子眼,并打開電腦上的工作站,將屏幕調(diào)整到合適大小移到中間; (4)先用低倍物鏡(4倍)觀察樣品,轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋和移動(dòng)手輪,把樣品移到視野中間并調(diào)至清晰; (5) 轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使高倍物鏡(10倍)對(duì)準(zhǔn)樣品,調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋,使視野清晰;如果樣品稍有偏離視野中央則調(diào)節(jié)移動(dòng)手輪把樣品調(diào)到中央; (6) 再次轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器,使高倍物鏡(40倍)對(duì)準(zhǔn)樣品進(jìn)行觀察,方法同10倍物鏡操作方法;此時(shí)視野亮度可能會(huì)變暗,應(yīng)當(dāng)調(diào)節(jié)內(nèi)置照明燈光亮度及光圈大小使視野亮度處于合適范圍; (7) 觀察完樣品后,取下載玻片,先將聚光器降下,再將物鏡轉(zhuǎn)成“八”字形,轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器使鏡筒下降,以免接物鏡與聚光器相碰,并將鏡筒緩緩下降到最低處,關(guān)掉電子眼及工作站,關(guān)閉電源,罩上防塵罩,將顯微鏡歸位。 2、日常維護(hù) (1)顯微鏡要放在干燥的地方,不能在陽光下暴曬和使用; (2)不要隨意取下目鏡,以防止塵土落入物鏡,也不要任意拆卸各種零件,以防損壞...
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搖出式聚光鏡(Swing out condenser)在使用低倍物鏡時(shí)(如4X),由于視場大,光源所形成的光錐不能充滿整個(gè)視場,造成視場邊緣部分黑暗,只中央部分被照亮。要使視場充滿照明,就需將聚光鏡的上透鏡從光路中搖出。
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TB菌因細(xì)胞璧富含脂質(zhì),因此能抵抗鹽酸酒精的脫色。TB Stain結(jié)核菌染色液為化學(xué)染色劑,主要用于對(duì)結(jié)核桿菌等抗酸性菌的化學(xué)染色??顾崛旧话阌卸N常用方法:1)鹼性復(fù)紅法(Ziehi-Neelsen法);2)螢光染色金胺O法(也稱為金胺O-羅丹明法)。本染劑系應(yīng)用的方法原理改良而成,染色過程不必加熱。結(jié)核菌、麻瘋桿菌等抗酸性菌,因其菌體表面有一層類脂或脂質(zhì)之皮膜不易著色,但一經(jīng)著色后,酸及乙醇的作用亦是不容易把它脫色。利用此特性并以增強(qiáng)的染色予以染色,然后再以酸及乙醇加以處理,使其脫色后對(duì)比染色,此時(shí)抗酸性菌仍是固定著最初染上的顏色(紅色),也就易于監(jiān)別。結(jié)核菌染色液 試藥內(nèi)容:1. Carbolfuchsin x 1 250ml(碳酸復(fù)紅溶液)2. Acid Alcohol x 2 250ml(酸性酒精)3. Counter Stain x 1 250ml(復(fù)染劑)操作方法:1. 涂片經(jīng)火焰固定,加碳酸復(fù)紅溶液于涂片上,染色10min。(不需加溫步驟 )2. 放冷后,水洗。(水洗之后,盡可能將水份瀝乾或以濾紙吸干)。3. 加酸性酒精脫色2min。4. 水洗。(假設(shè)標(biāo)本面還可以看到殘存紅色時(shí),再添加酸性酒精至完全脫掉紅色為止)。5. 加復(fù)染劑染色10~30秒,水洗、干燥、鏡檢。結(jié)果判定:抗酸性菌(為結(jié)核菌)呈紅色,其它細(xì)菌及細(xì)胞呈藍(lán)色。結(jié)核菌...
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1、相差物鏡的調(diào)換安裝從物鏡轉(zhuǎn)換器上拆下普通物鏡,旋入相差物鏡,與普通目鏡配套使用。 2、轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋,把普通明視場聚光器至最低位,旋松固緊螺絲,卸下聚光器。把轉(zhuǎn)盤聚光器安放到相應(yīng)位置上,旋緊固緊螺絲,轉(zhuǎn)動(dòng)聚光器升降螺旋,使聚光器升至最高位置。轉(zhuǎn)盤聚光器的標(biāo)示孔,朝向操作者。此時(shí),轉(zhuǎn)盤聚光器上面的聚光鏡部分,進(jìn)入光路;下面的環(huán)狀光闌轉(zhuǎn)盤,可視需要轉(zhuǎn)動(dòng)使用,把與物鏡匹配的環(huán)孔旋入光路,使之處于轉(zhuǎn)盤聚光鏡下。 3、把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色鏡架上轉(zhuǎn)盤聚光器調(diào)換安裝后,要進(jìn)行合軸調(diào)中,使聚光器的光軸與顯微鏡的主光軸合一。其步聚如下: (1)把轉(zhuǎn)盤聚光器的環(huán)狀光闌調(diào)至“0”位,明視場照明的普通可變光闌進(jìn)入光路。 (2)旋轉(zhuǎn)聚光器升降螺旋,聚光器升至最高位。 (3)接通照明光源,使視場明亮。 (4)把被檢樣品放到載物臺(tái)上,用低倍(4×)物鏡聚焦。 (5)縮小鏡座上的視場光闌開孔,至最小。 (6)從目鏡觀察,在暗視場中可見一縮小的、明亮的、多角形的視場光闌圖像。 (7)轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)盤聚光器的兩個(gè)調(diào)中桿,推動(dòng)聚光器,把視場中的明亮的多角形的視場光闌圖像,調(diào)至視場中央。 (8)開放視場光闌至視場同大,視兩者周邊是否完全重合;否則,復(fù)用調(diào)中螺桿,使聚光器精神調(diào)中。...
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DIC 與相差成像技術(shù)的最根本區(qū)別體現(xiàn)在它的光學(xué)基礎(chǔ)上。通過比較可知,這兩種“對(duì)比增強(qiáng)型”成像效果區(qū)別明顯,但同時(shí)又有很多相似之處。擴(kuò)展閱讀:倒置顯微鏡微分干涉觀察時(shí)的影響因素有哪些? 在相差成像中,圖片的密度區(qū)別源于光通過樣品時(shí)的路程長短不一?;冶尘罢嗖钕?,那些較厚的區(qū)域(光程長)在視野中呈現(xiàn)較周圍暗的效果;相對(duì)的,較薄的樣品或折射率低于周圍介質(zhì)的樣品在視野下則要亮些。 在DIC 成像技術(shù)中,情況又有些不同。DIC 成像時(shí),決定對(duì)比度的首要因素是光通路中的梯度變化(即光波傳播方向上的變化率)。梯度大的區(qū)域在視野下對(duì)比度高,并呈現(xiàn)出“偽立體”效果——這是DIC 的特征效果;而梯度較小的區(qū)域,如扁平的上皮細(xì)胞,則不會(huì)有很明顯的對(duì)比度呈現(xiàn),而且灰度值通常與背景相同。除了這兩種成像技術(shù)機(jī)制上的差異,它們還有很多其他方面的不同。如Figure 1 所示,為DIC 及相差技術(shù)下三組相同的樣品利用數(shù)字相機(jī)獲得的圖片。圖中第一行采用的是DIC 成像技術(shù),下面一行采用了相差成像技術(shù)。我們可以看到,F(xiàn)igure 1(a) 圖中細(xì)胞及細(xì)胞核的周圍有一圈光暈存在,而Figure 1(b) 中則不存在這一現(xiàn)象。DIC 研究表明(方法未列出),在細(xì)胞的表面有細(xì)菌分布,而利用相差技術(shù)則檢測不到這一效果。 ...
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