注：我們常說的相襯顯微鏡,比較顯微鏡均指相差顯微鏡。相差顯微鏡由P·Zernike（采爾尼克）于1932年發明，并因此獲1953年諾貝爾物理學獎。這種顯微鏡最大的特點是可以觀察未經染色的標本和活細胞。我們知道，人眼只能區分光波的波長（顏色）和振幅（亮度），對于無色透明的生物標本，當光線通過時，波長和振幅變化不大，在明場觀察時很難觀察到標本。相差顯微鏡的基本原理是：把透過標本的可見光的光程差變成振幅差，從而提高了各種結構間的對比度，使各種結構變得清晰可見。光線透過標本后發生折射，偏離了原來的光路，同時被延遲了1/4λ（波長），如果再增加或減少1/4λ，則光程差變為1/2λ，兩束光合軸后干涉加強，振幅增大或減小，提高反差。在構造上，相差顯微鏡有不同于普通光學顯微鏡兩個特殊之處：1、環形光闌（annular diaphragm）：位于光源與聚光器之間，作用是使透過聚光器的光線形成空心光錐，焦聚到標本上。2、相位板（annular phase plate）：在物鏡中加了鍍有特殊膜層（如氟化鎂、硫化鋅與鉻等）的相位板，可將直射光在規定的區域內通過，且被吸收掉大量的光能量，使直射光的振幅衰減至與衍射光振幅相當，同時改變某一個位相差，分為兩種：（1）A+相板：將衍射光的相位推遲1/4λ（90°），兩組光波合軸后光波相加，振幅加大，當標本折射率大于周圍介質時，標本圖像比背景暗，...
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阿貝聚光鏡（Abbe condenser）由德國光學大學大師恩斯特·阿貝（Ernst Abbe）(蔡司公司的創始人之一)設計。阿貝聚光鏡由兩片透鏡組成，有較好的聚光能力，但是在物鏡數值孔徑高于0.60時，則色差，球差就顯示出來。因此，多用于普通顯微鏡上。傳統顯微鏡的聚光鏡，一般由聚光鏡和光闌組成。聚光鏡支架以齒條、齒輪銜接的導軌連接在顯微鏡鏡臂下端，位于載物臺下方；側方有調節旋鈕可做豎直方向上的升降調節；光闌多用調節孔徑大小。聚光鏡多由2~3片透鏡組成，前端透鏡即面向物鏡的透鏡上面為平面，這種聚光鏡的NA值（鏡口率）是固定不變的，有些可以更換不同NA值的前透鏡，以與不同NA值物鏡相匹配。
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消色差聚光鏡（Achromatic aplanatic condenser）這種聚光鏡又名“消色差消球差聚光鏡”和“齊明聚光鏡”，它由一系列透鏡組成，它對色差球差的校正程度很高，能得到理想的圖像，是明場鏡檢中質量最高的一種聚光鏡，其NA值達1.4。因此，在高級研究顯微鏡常配有此種聚光鏡。它不適用于4X以下的低倍物鏡，否則照明光源不能充滿整個視場。
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熒光顯微鏡使用方法和操作規程：1.用窗簾遮蔽光線，關閉房間內的燈光，除去顯微鏡的防塵罩，確保顯微鏡燈室通風良好、無遮蓋。裝上汞燈燈箱，并轉動燈箱卡圈上的撥桿，將燈箱與鏡臂連接。2.將汞燈燈箱的電源插頭插入熒光電源箱后的插座，再將熒光電源箱的插頭插入220V外接電源。3.打開電源開關，電壓表顯示出電源電壓，如電源電壓波動不大于額定電壓值的±5%，即可按下啟動開關點燃汞燈，如因天氣太冷或電壓不穩定等原因，一次啟動未點燃汞燈，可以多撳動幾次。待超高壓汞燈弧光達到穩定狀態并達到最大發光效率，即可開始工作。4.燈泡的調中：（1）任選一塊標本放在載物臺上；（2）轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移出光路，轉動濾色片組轉換手輪，將紫光(V)或藍光(B)或綠光(G)激發濾色片組轉入光路，并將10X熒光物鏡轉入光路；（3）調節粗微調手輪，將標本像調焦清晰；（4）前后推動垂直照明器右邊的聚光鏡調焦推桿，使視場光欄成像清晰，轉動視場光欄撥桿將視場光欄收小，調節視場光欄調中螺釘使視場光欄居中，然后再將視場光欄開至最大；（5）轉動鏡臂上的聚光鏡旋鈕使聚光鏡移入光路，前后調節燈箱上的聚光鏡撥桿，使汞燈的弧光在視場內成像清晰；（6）調整燈箱上的燈泡水平調節螺釘和垂直調節螺釘，使汞燈的弧光居中；（7）調整反光鏡水平調節螺釘和垂直調節螺釘，使光源的反射像與汞燈的弧光分開；（8）轉動聚光鏡旋鈕把聚光鏡移出光路，...
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Q：熒光顯微鏡燈泡的壽命有多少？A：汞燈使用注意事項：目前通常使用的為50W超高氣壓汞燈，燈管內通有一對鎢電極和液態汞（室溫下附在管壁上），未點燃時，管內氣壓很低，在燈管的兩電極間施加電壓點燃后，汞氣化為汞蒸汽形成汞弧而產生強光，溫度升高，管內氣壓迅速升到10個大氣壓。由于是高氣壓的氣體放電，必須了解其特性才能安全地使用汞燈。以下來自百度搜索： a.汞燈接通電源后需要10-15min預熱時間，汞才能充分汽化并形成汞弧，產生高亮度而穩定的激發光。因此，觀察前要提早通電；b.汞燈在使用過程中，不要隨意開關汞燈的電源； c.關掉汞燈電源后，必須等待15-20min，待汞燈自然冷卻后才可再次接通電源，違反這一操作規定時，將會造成嚴重后果！由于汞燈內的汞蒸氣未完全液化，汞蒸氣內阻很小，一旦通電在兩電極間施加電壓，汞燈內形成強大的電流，輕則燒斷保險絲或燒毀汞燈電源中的扼流圈，重則汞燈爆炸，汞蒸氣彌漫整個實驗室，造成工作人員中毒，不僅損失了汞燈，還會炸毀燈室內的集光-聚光部件。 d.汞燈的使用壽命一般只有300h，使用得當可達600h，使用壽命與開關的次數成反比，應集中一批樣品作2-3h的觀察。汞燈價格昂貴，應珍惜使用。e.汞燈壽命終結的標志是點燃困難，燈管發黑。
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1、吖啶橙：吖啶橙是最經典的靈敏的熒光染料，它可對細胞中的DNA和RNA同時染色而顯示不同顏色的熒光，DNA呈綠色熒光，RNA呈橙紅色熒光。 2、EB：染色DNA和RNA。 3、熒光素雙醋酸酯(FDA)：FAD 本身無熒光,無極性，可透過完整的原生質膜。一旦進入原生質體后，由于受到酯酶分解而產生具有熒光的極性物質熒光素。它不能自由出入原生質膜，因此有活力的細胞能產生熒光，無活力的原生質體不能分解FAD無熒光產生。5mgFDA溶于1ml丙酮中，避光4℃下貯存，使用時取0.22mlFDA貯存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中。使用時，使最終濃度為0.01%。 4、熒光染料Ho33342和若丹明123：活細胞雙熒光染色觀察細胞核和線粒體。一般的生物染料不能穿透細胞膜，只有當細胞被固定后改變了細胞膜的通透性，染料才能進入細胞內。但有些活體染料能進入活細胞，并對細胞不產生毒性作用。熒光染料Ho33342和若丹明123都是活體染料。Ho33342能與細胞中DNA進行特異的結合，若丹明123能與線粒體進行特異的結合。采用兩種熒光染料的混合染液可對一個活細胞的核和線粒體同時染色。
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